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2016-09-01ELISA实验操作要点:ELISA实验中缓冲溶液等试剂的配置

ELISA实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础,ELISA试剂以及各种溶液如何配置?最近刚做了下ELISA实验,把各种ELISA配置方法汇总如下:
1、ELISA实验包被缓冲液
2、ELISA实验洗涤缓冲液
3、ELISA实验稀释液
4、ELISA实验终止液
5、ELISA底物缓冲液
6、ELISA实验TMB四甲基联苯胺、使用液
7、ELISA实验ABTS使用液
8、ELISC

试剂

1、ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):
NaHCO3 1.59g
NaHCO3 2.93g
加蒸馏水至1000ml

2、ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS):0.15M
KH2PO4  0.2g
Na2HPO4·12H2O 2.9g
NaCl  8g
KCl 0.2g
Tween-20 0.05% 0.5ml
加蒸馏水至1000ml

3、ELISA实验稀释液:
牛血清白蛋白(BSA) 0.1g
加洗涤缓冲液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5~10%使用。

4、ELISA实验终止液(2M H2SO4):
蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸98%、21.7ml。

5、ELISA底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):
0.2M Na2HPO4(28.4g/L)  25.7ml
0.1M 柠檬酸(19.2g/L) 24.3ml
加蒸馏水50ml

6、ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml无水乙醇) 0.5ml
底物缓冲液(PH5.5) 10ml
0.75%H2O2  32μl

7、ELISA实验ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
底物缓冲液(PH5.5) 1ml
3%H2O2 2μl

8、ELISA实验封闭液:
牛血清白蛋白(BSA) 5g
加洗涤缓冲液至100ml
值得一提的是有的封闭液中含有脱脂奶粉,不适合长期保存。

为了保证ELISA实验的准确性,实验操作中加入的缓冲液和各组分一定要精确,将洗涤液加入酶标板中的时候防止加入的试剂混入另外一个酶标孔,严防交叉污染。


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