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2016-09-12ELISA实验概念与原理:免疫酶测定法(ELISA)实验原理及类型

ELISA实验原理及类型

将已知抗体或抗原结合在某种固相载体上,并保持其免疫活性。测定时将待检标本和酶标抗体或酶标抗原按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应,用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离物成分,然后加入底物显色,进行定性或定量测定。

ELISA可用于检测抗体,也可用于检测抗原。根据检测目的和操作步骤的不同,通常有三种类型的检测方法。
1.间接法 此法是检测抗体最常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体上,加入待测血清(抗体)与之结合,洗涤后,加酶标抗体和底物进行测定。其原理见图一。
ELISA间接法示意图
图一 ELISA间接法示意图
 
2.双抗体夹心法 此法常用于检测抗原。将已知抗体吸附于固相载体,加入待测标本(含相应抗原)与之结合,温育后洗涤,加入酶标抗体及底物溶液进行测定。见图二。
双抗体夹心法检测抗原
图二 双抗体夹心法检测抗原

3.竞争法 此法可用于抗原及半抗原的定量测定,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,将特异性抗体吸附于固相载体上,加入待测抗原和一定量的已知酶标抗原,使二者竞争地与固相抗体结合,经过洗涤分离,最后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。见图三。
竞争法测抗原示意图
图三 竞争法测抗原示意图
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