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2016-12-01ELISA实验技巧:ELISA试剂盒ELISA空白孔的设置

ELISA试剂盒ELISA空白对照有几种:

1. 空气空白\水空白:一般是用于仪器调零的,所有孔数值减掉该孔数值。
2.底物空白:一般是用于防止底物弱显色所造成的读数偏高,同样所有孔数值减掉该孔数值(只加底物和终止液)
3. 酶空白:一般在2步法实验中使用,主要是看酶是否和板有非特异性结合的,一般不做这个 。

ELISA空白孔一般设一个,这是为了减除显色液的OD值。而阴性和阳性标准品最好是设2个复孔,虽然有点浪费,但为了确保实验的可靠性,我认为还是很有必要的。ELISA空白孔加什么?一般两个做法,看个人习惯或者说看你们实验室的习惯:
1,什么都不加,然后那个孔按照操作流程来做,这个说法的根据就是空白,也就是什么都没有。
2,加样本稀释液,然后按照操作流程来做。这个做法的根据就是只要不含阳性物质就算是空白的,加入样本稀释液的目的是为了使这个孔除了在没有阳性物质上其他的都与其他孔一致。

怎麽控制显色时间?

显色时间要通过预实验找到所测所有sample的显色OD在0.1到2.0的有效range间,我用过OPD solution,一般incubation for 15min at RT,测一次然后立即加入stop solution 在测一次。


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