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2016-12-20ELISA试剂盒常见问题处理

 
 

ELISA试剂盒常见问题处理
 
出现问题 出现问题的原因 解决办法
 曲           线
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
OD值不正常
 
 
 
 
 
 
 
试剂盒未回温 试剂盒回温到25℃
温度控制不好 控制正确温度
孵育时间不准确 控制孵育时间
洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加 洗涤4-5次,每孔250ul,然后拍干
阳光直射,对着风直接吹 避风避光
酶标仪的波长错误 酶标仪的波长450nm
抗体的稀释错误 正确的稀释抗体
水质问题 用娃哈哈矿泉水代替
 
白   板
 
 
洗涤液配制错误 正确的配制洗涤液
少加液体(抗体、酶标记物、A液、B液) 正确的步骤加液体
错加液体  
 
无 梯 度
 
 
标准品也污染 换标准品点板
OD值不正常 控制温度时间在做一次
人为点板 /
线 性 不 好
 
OD值不正常 控制温度时间在做一次
人为点板 /
回  收  率
 
 
 
 
 
 
 
空白管阳性高
 
 
样本本身就是阳性样本 换阴性样本做回收率
空白管在实验中被污染 实验中防止交叉污染
水质原因 用娃哈哈矿泉水代替
 
 
偏  高
 
 
 
 
添加量不准确 精准的添加量
添加浓度不适合 添加合适的浓度
取液吹干量多 准确的取液吹干
取到其它相层液体 取需用相吹干
复溶液未稀释或加入量少 正确的稀释复溶液
 
偏  低
 
 
 
添加量不准确 精准的添加量
添加浓度不适合 添加合适的浓度
取液吹干量少 准确的取液吹干
复溶液稀释错误或加入量多 正确的稀释复溶液
 
 
假阴、阳性
 
 
 
 
 
水质原因 点复溶液验证 用娃哈哈矿泉水代替
实验操作原因
 
 
 
吸取到其它相吹干 准确的取液吹干
离心不彻底 延长离心时间
样本的污染 更换样本
乳化未处理完全 温浴(70℃)处理乳化现象
仪器试剂原因
 
离心管未清洗干净 正确的洗涤器具
有机溶剂的影响 做试剂空白看影响结果
衍生化试剂原因(长时间衍生化试剂变质) 更换衍生化试剂
与曲线好坏相关 保证曲线的正常
 
 
金标检测(T)线颜色较浅
 
 
尿液pH偏碱性 用0.01M HCl调节尿液pH值到7.0左右。
尿样滴加过多 重新测定,尿样按照说明书,控制在2滴
尿液过于混浊 将尿液离心后,取上清液重新测定
 
 
金标质控(C)线不出现
 
 
 
 
 
 
检测卡由于高温、受潮等原因失效 尿样需要重新检测。
过了有效期失效。 该批号的金标应丢弃处理,尿液需要重新检测
 
操作过程中检测卡没有平放,导致液体样品直接冲过检测区 尿样需要重新检测,且检测卡平放于桌面上再加样。
尿液样品中含有较高的抑制或者干扰抗原抗体反应的物质(比如明矾、小苏打、氧化剂、肌酐等) 该尿液的检测结果无效
金标卡上在除了T和C线之外的其他地方出线 金标卡上的划痕;胶体金在跑板过程中没有完全跑干净而遗留在卡上的痕迹; 该检测卡结果不可信,尿液需要重新检测。
实验重复性不好 操作人员的不一致,取样的不一致,样本数量的多少,加样时间的长短,洗涤条件不一致,加样量不一致 尽量保持的实验一致性
 
分析软件的使用
 
不能设置和保存 正确的设置和保存
如何判断曲线的好坏和分析结果 正确的判断曲线的好坏和分析结果
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